Аскосфероз

Определение и таксономическое положение возбудителя

Аскосфероз (известковый расплод, перицистоз) — инвазионное грибковое заболевание медоносных пчёл (Apis mellifera), поражающее преимущественно печатный расплод трутней и рабочих особей. Заболевание характеризуется мумификацией личинок и куколок, превращением их в плотные известково-белые или серовато-чёрные образования.

Возбудитель — фитопатогенный аскомицет Ascosphaera apis (Maassen ex Claussen) из порядка Onygenales, семейства Ascosphaeraceae. Гриб является облигатным паразитом пчёл, не способным к сапротрофному росту вне организма хозяина. В жизненном цикле A. apis выделяют две стадии:

Вегетативная (мицелиальная) — тонкие гифы (2–5 мкм в диаметре), прорастающие через кутикулу личинки и пронизывающие все её ткани.
Генеративная (спороносная) — образование спороцист (шаровидных плодовых тел диаметром 65–140 мкм), внутри которых формируются аскоспоры.

Споры A. apis — эллипсоидные, размером 1,5–3,5 × 1,2–2,5 мкм, заключены в тёмно-коричневую оболочку. Отличительная особенность — чрезвычайная устойчивость к неблагоприятным факторам: споры сохраняют жизнеспособность в течение 15–35 лет при высушивании, выдерживают нагревание до 100°C в течение 15 минут и замораживание до −40°C.

Эпизоотология и распространение

Аскосфероз регистрируется во всех регионах пчеловодства мира, однако наибольшую экономическую значимость заболевание приобретает в зонах с влажным и прохладным климатом. В России вспышки аскосфероза наиболее характерны для Нечерноземья, Сибири, Дальнего Востока и северо-западных регионов.

Факторы распространения

Климатические условия — оптимальная температура для развития гриба 25–30°C, влажность 80–95%. Холодная дождливая весна создаёт предпосылки для массового поражения расплода.
Стрессовые факторы — ослабление семей вследствие недостаточного медосбора, поздних весенних похолоданий, поражения варроатозом и нозематозом.
Антропогенные факторы — бесконтрольное использование антибиотиков, нарушение ветеринарно-санитарных норм, скученное расположение пасек.
Кормовая база — дефицит пыльцы и перги снижает иммунный статус личинок, увеличивая восприимчивость к инвазии.

Пути передачи

Алиментарный — заражение личинок через корм (молочко, мёд, пергу), содержащий споры гриба.
Контактный — передача спор при чистке ячеек, кормлении расплода, каннибализме больных личинок.
Трансовариальный — споры сохраняются на поверхности яиц, отложенных в заражённые ячейки.
Инструментальный — перенос возбудителя с инвентарём, ульями, вощиной, пчелопакетами.

Патогенез и патологоанатомические изменения

Механизм инвазии

Споры A. apis попадают в кишечник личинки вместе с кормом. Прорастание спор происходит в среднем отделе кишечника при pH 6,8–7,2 и наличии свободных аминокислот. Вегетативные гифы проникают через перитрофическую мембрану, затем через эпителиальные клетки кишечника в гемоцель личинки.

Инкубационный период составляет 2–4 дня. Наиболее восприимчивы личинки 3–5-дневного возраста (перед запечатыванием ячеек). После запечатывания ячейки гифы гриба прорывают кутикулу личинки и прорастают на её поверхность, формируя плотный мицелиальный войлок.

Стадии поражения

Латентная стадия — споры находятся в кишечнике, клинические признаки отсутствуют.
Стадия прорыва — гифы проникают в гемоцель, личинка теряет подвижность, перестаёт потреблять корм.
Стадия мумификации — после гибели личинки мицелий полностью заполняет её тело, образуя плотный конгломерат.
Стадия споруляции — на поверхности мумифицированной личинки формируются тёмные спороцисты, придающие ей серовато-чёрный оттенок.

Патологоанатомическая картина

Мумифицированные личинки — белые, плотные, мелоподобные образования, заполняющие ячейку. При извлечении пинцетом легко крошатся.
Поражённые куколки — имеют характерный вид: голова приподнята, тело укорочено, крылья недоразвиты.
Трутневый расплод — поражается чаще рабочего, так как трутневые ячейки крупнее, а период развития дольше.
Изменение поведения пчёл — пчёлы-чистильщицы не всегда способны удалить мумифицированные остатки из ячеек, особенно при массовом поражении.

Клинические признаки и диагностика

Внешние признаки поражения семьи

Пёстрый расплод — на соте чередуются запечатанные и незапечатанные ячейки, среди здорового расплода видны мумифицированные личинки.
Горбатый расплод — при поражении трутневого расплода крышечки ячеек приподняты и имеют характерную выпуклую форму.
Снижение лётной активности — пчёлы становятся вялыми, сокращается количество вылетов за взятком.
Ослабление семьи — уменьшение численности пчёл, сокращение расплода, снижение медопродуктивности.

Лабораторная диагностика

Микроскопия — обнаружение спороцист и аскоспор в мазках из мумифицированных личинок.
Микологическое исследование — посев на среду Сабуро с добавлением антибиотиков (хлорамфеникол, стрептомицин) для подавления бактериальной микрофлоры. Культивирование при 25–30°C в течение 7–14 дней.
ПЦР-диагностика — амплификация участка гена 18S рРНК с использованием видеспецифичных праймеров.
Серологические методы — иммуноферментный анализ для выявления антигенов гриба в экстрактах поражённого расплода.

Дифференциальная диагностика

Аскосфероз необходимо отличать от следующих заболеваний:

Гнильцы (американский и европейский) — при гнильцах поражённые личинки размягчаются, имеют гнилостный запах, тогда как при аскосферозе они мумифицируются.
Мешотчатый расплод — при мешотчатом расплоде личинки имеют вид мешочков, заполненных жидкостью.
Кандидоз — поражение вызывается дрожжеподобными грибами рода Candida, мумификация менее плотная, спороцисты отсутствуют.

Эпизоотологические особенности

Сезонность

Вспышки аскосфероза регистрируются преимущественно весной (апрель–июнь) и осенью (сентябрь–октябрь). Летом, в период активного медосбора, заболеваемость снижается вследствие:

повышения температуры в улье выше 35°C, что неблагоприятно для развития гриба;
усиления гигиенического поведения пчёл;
увеличения количества белкового корма (пыльцы), повышающего резистентность личинок.

Возрастная восприимчивость

Наиболее восприимчивы личинки 3–5-дневного возраста. Личинки младшего возраста (1–2 дня) менее восприимчивы вследствие высокой активности лизоцима в их гемолимфе. Личинки старшего возраста (6–7 дней) обладают достаточной иммунной защитой, так как у них завершается формирование кутикулы.

Пороговая концентрация спор

Для развития заболевания необходима концентрация спор в корме не менее 10⁴–10⁵ спор на 1 мл. При более низких концентрациях споры элиминируются перитрофической мембраной и фагоцитами гемолимфы.

Иммунитет и защитные механизмы

Гигиеническое поведение пчёл

Пчёлы-чистильщицы удаляют поражённых личинок из ячеек, что ограничивает распространение инфекции. Эффективность гигиенического поведения зависит от:

породы пчёл (среднерусские пчёлы проявляют более выраженное гигиеническое поведение, чем итальянские);
возраста пчёл (молодые пчёлы более активно удаляют поражённый расплод);
степени поражения (при массовом поражении гигиеническое поведение становится неэффективным).

Гуморальные факторы

Лизоцим — фермент, разрушающий клеточные стенки грибов, содержится в гемолимфе и молочке пчёл.
Апиальбенин — антимикробный пептид, выделяемый гипофарингеальными железами, обладает фунгицидной активностью.
Глюкозооксидаза — фермент, катализирующий образование перекиси водорода в мёде, создаёт неблагоприятные условия для прорастания спор.

Клеточные факторы

Гранулоциты — фагоцитируют споры гриба в гемоцеле личинки.
Плазматоциты — участвуют в инкапсуляции гиф гриба, формируя вокруг них многослойные капсулы.

Профилактика и меры борьбы

Организационно-хозяйственные мероприятия

Селекция — отбор и размножение семей, устойчивых к аскосферозу (высокая гигиеническая активность, устойчивость к стрессам).
Карантинные меры — запрет ввоза пчёл из неблагополучных хозяйств, изоляция вновь приобретённых семей.
Санитарные мероприятия — дезинфекция ульев, рамок, инвентаря 4%-ным раствором формальдегида или 3%-ным раствором перекиси водорода.
Оптимизация кормовой базы — обеспечение семей достаточным количеством пыльцы в весенний период, подкормка белковыми смесями при недостатке перги.

Лечебные мероприятия

Химиотерапия

Нистатин — полиеновый антибиотик, нарушающий синтез эргостерола в мембранах грибов. Применяется в дозе 100 000 ЕД на 1 л сахарного сиропа, курсом 7–10 дней.
Леворин — аналогичный механизм действия, 100 000 ЕД на 1 л сиропа.
Амфотерицин В — более эффективен, но токсичен для пчёл, применяется с осторожностью.
Клотримазол — азольный препарат, ингибирует деметилазу ланостерола, нарушая синтез эргостерола. Доза 50–100 мг на 1 л сиропа.

Фитотерапия

Чесночный настой — 30 г измельчённого чеснока на 1 л сахарного сиропа, обладает фунгицидной активностью.
Настой полыни горькой — 100 г сухой травы на 1 л воды, добавляют в сироп в соотношении 1:10.
Эфирные масла (тимьяновое, чабрецовое) — обладают выраженным фунгицидным действием, применяются в дозе 1–2 мл на 1 л сиропа.

Термотерапия

Обработка ульев — прогревание ульев до 45–48°C в течение 2–3 часов (при условии отсутствия расплода) приводит к гибели вегетативных форм гриба.
Обработка сотов — прогревание поражённых сотов до 50°C в течение 2 часов.

Биологические методы

Использование антагонистических микроорганизмов — бактерии рода Bacillus subtilis и Bacillus licheniformis выделяют антибиотические вещества, подавляющие рост A. apis.
Применение бактериофагов — специфические фаги, поражающие возбудителя, находятся в стадии экспериментальной разработки.

Экономический ущерб

Аскосфероз наносит значительный экономический ущерб пчеловодству:

Гибель расплода — потеря 20–80% расплода в поражённых семьях.
Снижение медопродуктивности — уменьшение медосбора на 30–60% вследствие ослабления семей.
Затраты на лечение — приобретение препаратов, проведение лечебных обработок.
Потеря пчелиных семей — при тяжёлых формах заболевания возможна гибель 10–30% семей.
Снижение опылительной активности — ослабленные семьи менее эффективно опыляют энтомофильные культуры.

Взаимосвязь с другими заболеваниями

Аскосфероз часто протекает в ассоциации с другими патологиями:

Варроатоз — клещ Varroa destructor ослабляет иммунитет личинок, повышая их восприимчивость к грибковой инвазии.
Нозематоз — поражение Nosema apis снижает общую резистентность семьи.
Вирусные болезни пчёл — вирус деформации крыла и другие вирусы, передаваемые клещом, усиливают тяжесть течения аскосфероза.
Акарапидоз — поражение трахей клещом Acarapis woodi ослабляет дыхательную функцию пчёл, способствуя развитию грибковой инфекции.

Заключение

Аскосфероз — серьёзное грибковое заболевание медоносных пчёл, требующее комплексного подхода к диагностике, профилактике и лечению. Успешная борьба с заболеванием возможна только при сочетании организационно-хозяйственных мероприятий, селекционной работы и своевременного применения эффективных лечебных препаратов. Важнейшим аспектом является повышение естественной резистентности пчелиных семей через оптимизацию кормовой базы, поддержание сильных семей и отбор устойчивых линий пчёл. Дальнейшие исследования в области молекулярной биологии возбудителя и иммунитета пчёл открывают перспективы для разработки новых, более эффективных методов борьбы с аскосферозом.